شناسایی ، استخراج و کلون ژن های دخیل در بیوسنتز بیوسورفکتنت رامنولیپید

امروزه دانشمندان با توجه به سازگاری بیوسورفکتنت ها با محیط زیست و نیز سرطان زا نبودن این مواد در راه جایگزین کردن سورفکتنت های شیمیایی با بیوسورفکتنت ها تلاش فراوانی می نمایند.یکی از بیوسورفکتنت ها ،بیوسورفکتنت رامنولیپید می باشد که می تواند کاربرد های متعددی در صنایعی چون صنعت داروسازی،صنعت نفت،صنایع مواد غذایی،مواد آرایشی بهداشتی و... داشته باشد.یکی از مشکلات اصلی تولید این بیوسورفکتنت در مقیاس صنعتی ، شرایط طبیعی تولید این بیوملکول می باشد که تولید مقرون به صرفه و اقتصادی این بیوسورفکتنت را با مشکل روبرو ساخته است.اپرون مسئول تولید این بیوسورفکتنت در شرایطی فعال می شود که تراکم سلول های تولید کننده این بیوملکول بالا رفته باشد و سلول های باکتری در فاز سکون خود قرار داشته باشند.المنت های تنظیمی موجود در این اپرون مسئول تولید این بیوملکول در شرایط مذکور می باشند. شرایط طبیعی تولید بیوسورفکتنت رامنولیپید برای تولید اقتصادی این بیوملکول شرایط مناسب و ایده آلی به شمار نمی آید. ما با حذف المنت های تنظیمی اپرون تولید کننده بیوسورفکتنترامنولیپید،ایجاد کانستراکت مناسب با ژن های rhlab و ترانسفورماسیون باکتری های مستعد e.coli bl21 تولید این بیوملکول را در فاز لگاریتمی باکتری های دست ورزی شده e.coli bl21 مورد بررسی قرار دادیم.ما از باکتری سودوموناس آئروجینوزا pg201 به عنوان کنترل مثبت و از باکتری e.coli bl21 که ژنهای rhlab را نداشت به عنوان کنترل منفی بهره جستیم. با استفاده از پلیت ctab تولید وترشح رامنولیپید در باکتری های دست ورزی شده به اثبات رسید.با استفاده از روش کروماتوگرافی لایه نازک(tlc) حضور بیوسورفکتنت مونورامنولیپید در سوپرناتانت باکتری های دست ورزی شده محرز گردید و با انجام آنالیز ftir از پیوند های مورد نظر در بیوملکول استخراج شده اطمینان حاصل گردید. همچنین با آنالیز esi مونورامنولیپید حاصل از باکتری های دست ورزی شده دقیقا تعیین خصوصیت گردید. در مرحله بعد با استفاده از روش پراکنش لکه روغن و نیز تنسیومتری میزان نسبی تولید این بیوسورفکتنت مورد ارزیابی واقع شد.در پایان با استفاده از متدe24 قدرت بیوسورفکتنت استخراج شده از باکتری های دست ورزی شده در شرایط شوری و ph مختلف بررسی شد